大小鼠腫瘤切片模具的操作、實驗試劑以及方法
更新時間：2018-12-24 點擊次數：3223次
大小鼠腫瘤切片模具的操作、實驗試劑以及方法
大小鼠腫瘤切片模具包括大鼠腦模具和小鼠腦模具。腦模具經過精密機械加工和高度拋光,可確保切片過程的可重復性。使用材料為不銹鋼,結實耐用,可被加熱、冷卻、高壓滅菌(只限不銹鋼型)、擦洗,經得起苛刻的使用條件。冠狀腦模具具有矢狀中線,可方便的分離左右腦半球。切片精度至1mm,小鼠腦模具也適用于新生大鼠。
如何進行大小鼠腫瘤切片模具模型的建立及鑒定實驗腫瘤學的需要導致腫瘤動物模型的產生,借以研究人類腫瘤的病因、發生、發展以及治療和預防。大小鼠腫瘤切片模具可來自于動物的自發腫瘤、誘發腫瘤和移植性腫瘤。
一前兩者由于對動物品系要求嚴格、實驗周期較長或缺少實驗一致性而較少使用。大小鼠腫瘤切片模具具有特性明確、生長一致性好、實驗周期短、瘤株分布廣泛、可反復復制等優點,在腫瘤研究中占有重要地位。可移植性腫瘤,是把動物或人的腫瘤移植到同系、同種或異種動物,經傳代后,組織類型和生長特性已趨穩定,并能在受體動物中繼續傳代,又稱為可移植性腫瘤細胞。
二可移植性腫瘤移植于同系或同種動物,稱為同種移植,是常用的腫瘤動物模型復制方法之一。同種移植的優點是,可供選擇使用的細胞系或細胞株多,許多細胞系在世界范圍分布廣泛,并且這些細胞的生物學特性已經比較明確,一般都有明確的背景資料,使一群動物同時接種同樣量的瘤細胞,生長速度一致、個體差異較小,成活率高,易于對照觀察,這些都是便于科研成果相互比較和交流的有利因素
三在接種過程中，應把握注射深度，否則易造成內臟損傷。接種后三天即開始觀察有無腫瘤形成。本實驗具有周期短、制作方便、成功率比較高、較好重復性和穩定性的明顯優勢，是一種較為理想的腫瘤實驗動物模型，值得推廣。
二.大小鼠腫瘤切片模具的實驗試劑以及方法
大小鼠腫瘤切片模具模型的建立：
抗腫瘤藥物及制劑的藥效學評價，可通過建立小鼠荷瘤數據模型，探索腫瘤生長的本質及其發生發展的規律，探究其抗腫瘤效果。
方法：
小鼠右腋下注射H22腫瘤細胞，注射部位發生癌變，小鼠腫瘤生長明顯，切片結果證明實驗成功，模型構建完成，使小鼠荷瘤，觀察腫瘤生長，記錄體重數據并建立動物模型。
取20只昆明鼠隨機分成A組（10只），B組（5只），C組對照組（5只），編號飼養。
1.1.2試劑：
無菌水，生理鹽水，臺酚藍，2%冰醋酸，甲醛，乙醇，二甲苯，石蠟等。
1.1.3儀器：
離心機，顯微鏡，計數板，電子稱，超凈工作臺，溫箱，切片機等。
三.實驗步驟
取H22腫瘤細胞，3000轉離心分鐘，再用無菌生理鹽水洗滌腫瘤細胞3次，并做適當稀釋，取40微升細胞懸液加入10微升0.4%臺酚藍染色并鏡檢計數，制成濃度為3*106個/ml的腫瘤細胞懸液，每只小鼠右腋皮下接種腫瘤細胞懸液0.2毫升。
細胞計數液2%冰醋酸溶液。取50微升細胞懸液加入450微升的細胞計數液中計數。
接種完成后,逐日觀察接種部位有無感染,腫瘤生長后有無自然消退,用游標卡尺，每周測量腫瘤長徑a和短徑b,并計算平均直徑,即r=(a+b)/2，每天稱量小鼠體重和腫瘤并記錄，繪制曲線。
1.4制備組織切片：
a處死小鼠，將腫瘤組織切成1*1*0.4cm的小塊。
b將切塊的組織置于螺口瓶中，加入40%甲醛固定，過夜。
c固定完成后，倒出固定液，立即換上新鮮的70%乙醇，洗脫兩次，室溫放置20分鐘，繼而以75%，80%，85%，90%，95%，100%乙醇脫水各兩次，每次20分鐘。
d從新鮮二甲苯除去乙醇，放置2次，每次10分鐘。
e將樣品置于60℃溫箱中融化石蠟4次，每次1.5小時。
f將準備好的包埋工具，用一熱玻璃吸管加入融化的石蠟，再用熱鑷子快速將樣品移至充滿石蠟的模具中，置于室溫，使起*凝結。
g從包埋模具中取出石蠟塊，放于室溫干燥處，切片
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